王 锋,吴小涛,王运涛,邵建树,张 明.单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察[J].中国脊柱脊髓杂志,2010,20(4):300-304.
单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察
中文关键词:  椎间盘退行性变  髓核细胞  胶原酶  细胞培养  甲苯胺蓝  免疫细胞化学
中文摘要:
  【摘要】 目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况。结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P<0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。
Isolation and culturing of human degenerative intervertebral nucleus pulposus cells by solo collagenase Ⅱ and its morphology study
英文关键词:Intervertebral disc degeneration  Nucleus pulpusus cell  Collagenase  Cell culturing  Toluidine blue  Immunocytochemistry
英文摘要:
  【Abstract】 Objective:To investigate the feasibility of isolating and culturing of nucleus pulposus(NP) cells from degenerated human intervertebral discs by solo collagenase in vitro.Method:Nucleus pulposus from 20 human degenerated intervertebral disc sam
投稿时间:2009-11-27  修订日期:2010-02-03
DOI:10.3969/j.issn.1004-406X.2010.[quarter_id].300.[Nu
基金项目:江苏省自然科学基金资助项目(BK2007107);东南大学国家自然科学基金预研项目(XJ2008342)
作者单位
王 锋 东南大学附属南京市中大医院骨科 210009 南京 
吴小涛  
王运涛  
邵建树  
张 明  
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