银杏内酯、刺五加皂甙对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺血缺氧的作用

Effect and mechanism of ginkgolides,acanthopannx senticosus saponins on rat spinal cord motorneurons after anoxia in vitro

中文关键词:  银杏内酯  刺五加皂甙  细胞凋亡  缺血缺氧  运动神经元  缺氧诱导因子-1  大鼠

英文关键词:Ginkgolides  Acanthopanax senticousus saponins  Apoptosis  Hypoxia  Motor neurons  Hypoxia-inducible factor-1  Rats

中文摘要:

  目的:观察银杏内酯(ginkgolides,Gin)、刺五加皂甙(acanthopannxsenticosussaponins,ASS)对脊髓运动神经元缺血缺氧有无保护作用,并探讨其可能的机制。方法:无菌下取出孕15dSD大鼠的胚鼠,分离胚鼠脊髓运动神经元进行原代分离培养,免疫组化鉴定后建立缺血缺氧诱导的神经元凋亡模型。取运动神经元培养在24孔板中,分为对照组(无缺氧损伤)、缺氧诱导组、Gin保护组、ASS保护组、神经胶质细胞源性神经营养因子(glialcellderivedneurotrophicfactor,GDNF)保护组,每组10孔。其中保护组分别于缺氧前24h每孔加入Gin37.5μg/ml,ASS50μg/ml,GDNF0.1μg/ml(每孔800μl),缺氧后继续培养3d。倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学变化,MTT法测定神经元细胞活性,检测细胞外液LDH释放量,提取细胞匀浆液,Western印渍法检测运动神经元HIF-1α的表达。结果:神经元的细胞活性Gin组(0.25±0.059)、ASS组(0.21±0.028)和GDNF组(0.20±0.026)均比缺氧诱导组(0.15±0.012)高(P<0.01),且Gin组效果优于ASS组(P<0.05),GDNF作用与ASS相仿(P>0.05);LDH释放量Gin组(22.8±1.645)、ASS组(28.6±1.309)和GDNF组(26.5±0.885)均比缺氧诱导组(40.7±1.885)低(P<0.01);神经元HIF-1α的相对表达量缺氧诱导组(0.72±0.027)比对照组(0.16±0.003)高(P<0.01),Gin组(1.28±0.019)、ASS组(1.15±0.016)和GDNF组(1.12±0.016)均高于缺氧诱导组及对照组(P<0.01)。结论:Gin、ASS和GDNF均可提高体外缺血缺氧损伤的脊髓运动神经元的细胞活性,对细胞的缺血缺氧损伤有明显的保护作用,Gin的保护作用强于ASS,ASS的保护作用与GDNF相仿;其保护作用的发挥,可能与增强细胞膜的稳定性及提高细胞HIF-1α的表达有关。

英文摘要: