| 王 锋,吴小涛,王运涛,邵建树,张 明.单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察[J].中国脊柱脊髓杂志,2010,20(4):300-304. |
| 单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察 |
| Isolation and culturing of human degenerative intervertebral nucleus pulposus cells by solo collagenase Ⅱ and its morphology study |
| 投稿时间：2009-11-27 修订日期：2010-02-03 |
| DOI：10.3969/j.issn.1004-406X.2010.[quarter_id].300.[Nu |
| 中文关键词: 椎间盘退行性变 髓核细胞 胶原酶 细胞培养 甲苯胺蓝 免疫细胞化学 |
| 英文关键词:Intervertebral disc degeneration Nucleus pulpusus cell Collagenase Cell culturing Toluidine blue Immunocytochemistry |
| 基金项目:江苏省自然科学基金资助项目（BK2007107）；东南大学国家自然科学基金预研项目（XJ2008342） |
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| 中文摘要: |
| 【摘要】 目的：探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法：收集20例人退变椎间盘髓核，单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代，倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化，甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达，免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色，观察髓核细胞的类软骨表型表达情况。结果：单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞，20例人退变椎间盘髓核，培养成功16例；原代髓核细胞平均7d贴壁，呈类圆形或多角形，P1代髓核细胞平均12h贴壁，呈大梭形或多角形，两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d，差异有统计学意义（P＜0.01）；聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内，被甲苯胺蓝染成天蓝色，免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀，两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异（P＞0.05）。结论：单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤，提高培养效率；传一代后髓核细胞增殖速率提高，但仍维持类软骨表型，表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。 |
| 英文摘要: |
| 【Abstract】 Objective：To investigate the feasibility of isolating and culturing of nucleus pulposus（NP） cells from degenerated human intervertebral discs by solo collagenase in vitro.Method：Nucleus pulposus from 20 human degenerated intervertebral disc sam |
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