向强,周跃,李长青,徐峰,吕宏琳,郑文杰.应用RNA干扰技术抑制神经元E3B1基因表达及对轴突生长的影响[J].中国脊柱脊髓杂志,2008,(12):.

应用RNA干扰技术抑制神经元E3B1基因表达及对轴突生长的影响

Influence of RNA interference on expression of E3B1 gene in cultured cortical neurons and neurite regeneration

DOI：

中文关键词: RNA干扰神经细胞轴突

英文关键词:E381

基金项目:国家自然科学基金资助项目

向强周跃李长青徐峰吕宏琳郑文杰

第三军医大学新桥医院骨科,重庆市400038

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中文摘要:

目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制神经元E3B1基因表达及其对轴突生长的影响.方法:选择针对E381(NCBI:NM-024397)RNAi的3个靶位点Abil1、Abil2、Abil3和1个不针对任何mRNA的RNAi靶位点(阴性对照)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH,阳性对照),用带有neoR选择标志和GFP绿色荧光标志的真核表达载体pGenesil-1构建E381 RNAi质粒,分别转染培养的神经元,在荧光显微镜下观测转染率,经G418筛选得到单一的转染细胞,并用Western blot法检测各转染组神经元E3B1蛋白的表达情况,选出具有最佳抑制效应的siRNA转染神经元,加人轴突生长抑制物,观测轴突生长情况.结果:成功构建了RNAi质粒,各组细胞的转染率相近,均为34%左右.与阴性对照组相比,Abil1、Abil2和Abil3转染组细胞内E3B1 mRNA的表达都受到了不同程度的抑制,其中Abil3转染组细胞的E381 mRNA和蛋白的表达抑制最为显著,加入轴突抑制剂后Abil3转染组神经元轴突仍能继续生长.结论:应用RNA干扰技术能高效特异地抑制神经元E3B1基因的表达,E3B1基因的表达下调可促进神经元轴突的生长.

英文摘要:

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