| 郁时兵,肖建德,刘尚礼.人GDNF基因的腺病毒载体构建及其在人神经干细胞中的表达[J].中国脊柱脊髓杂志,2007,(9):-670,I0005. |
| 人GDNF基因的腺病毒载体构建及其在人神经干细胞中的表达 |
| Estabilshment and expression of recombinant human glial cell line-derived neurotrophic factor in human neural stem cells |
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| DOI： |
| 中文关键词: 胶质细胞源性神经营养因子 神经干细胞 基因 腺病毒 |
| 英文关键词:Glial cell line-derived neurotrophic factor Neural stem cells Gene Adenovirus |
| 基金项目:广东省自然科学基金;广东省科技厅科研项目 |
| 郁时兵 肖建德 刘尚礼 |
| [1]深圳市第二人民医院骨科,深圳市518035 [2]中山大学附属第二医院骨科,广州市510120 |
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| 中文摘要: |
| 目的：观察构建的含人胶质细胞源性生长因子（GDNF）基因腺病毒载体对人神经干细胞的感染及其基因表达情况,为脊髓损伤的基因及神经干细胞治疗提供前期实验依据。方法：从12周龄流产人新鲜胚胎中提取人神经干细胞并进行培养,行Nestin免疫荧光染色进行检验。将全长558bp编码人GDNF的cDNA克隆到重组腺病毒载体质粒,并在人胚肾细胞（HEK293细胞）中包装出含有目的基因hGDNF的腺病毒,然后用该腺病毒感染人神经干细胞,应用荧光显微镜和Western-blot检测病毒感染及外源基因的表达情况,并进行GFAP和Tubulin免疫荧光染色检测神经干细胞向神经细胞分化情况。结果：Nestin免疫荧光染色显示所培养细胞为阳性染色红色,表明其具有神经干细胞性状;感染48h后观察到神经干细胞中有大量的增强绿色荧光蛋白（EGFP）表达,以及hGDNF蛋白高表达;感染后的神经干细胞有长的伪足伸出,呈GFAP和Tubulin染色阳性,表明促进了神经干细胞向神经元的分化。结论：腺病毒对神经干细胞具有较高感染效率,可作为一种良好的基因导入载体,实现外源基因hGDNF在神经干细胞内的有效表达,并可为神经干细胞分化为神经元提供更有利条件。 |
| 英文摘要: |
| Objective:To investigate the interference and expression of human glial cell line-derived neurotrophic factor(hGDNF) gene in neural stem cells and to evaluate the roles of hGDNF in the genetic treatment of spinal cord injury.Method:Full-length GDNF cDNA,5 |
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